大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析
簡要描述：
大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析BL21-CodonPlus菌株來源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株，特別適合在大腸桿菌內(nèi)高水平表達異源蛋白。由于異源蛋白來源宿主大量存在的某些tRNA在大腸桿菌內(nèi)很是稀少，因此，想在大腸桿菌內(nèi)有效表達異源蛋白通常受到限制。外力驅動下的高水平表達異源蛋白會耗盡已有的稀有tRNA，導致翻譯中止。
產(chǎn)品時間：2024-12-16
打印當前頁BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2337-1000UL | BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell化學感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 450 |
MF2337-5000UL | BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell化學感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1880 |
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2337-1000UL | MF2337-5000UL | ||
MF2337-A | BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2337-B | Control Plasmid puC19, 10 pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
BL21-CodonPlus菌株來源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株，特別適合在大腸桿菌內(nèi)高水平表達異源蛋白。由于異源蛋白來源宿主大量存在的某些tRNA在大腸桿菌內(nèi)很是稀少，因此，想在大腸桿菌內(nèi)有效表達異源蛋白通常受到限制。外力驅動下的高水平表達異源蛋白會耗盡已有的稀有tRNA，導致翻譯中止。BL21-CodonPlus菌株正是根據(jù)此缺陷而基因改造后的菌株，額外添加在大腸桿菌內(nèi)最常見限制異源蛋白表達的幾種tRNA的基因拷貝。這些tRNA的存在使得許多原來在傳統(tǒng)BL21菌株內(nèi)表達很弱的異源蛋白能夠在BL21-CodonPlus菌株內(nèi)大量表達。BL21-CodonPlus-RIPL補充大腸桿菌缺乏的4種稀有密碼子（AGA, AUA, CCC, CUA）對應的tRNA（argU, ileY, proL, leuW），顯著提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-基因的異源蛋白在大腸桿菌內(nèi)的表達。
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株染色體還整合了λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調(diào)控的T7 RNA聚合酶基因），可用于pET系列、pGEX、pMAL等載體的蛋白表達，同時具有四環(huán)素，氯mei素，鏈mei素和壯觀mei素抗性。
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株基因型：F–ompT hsdS(rB–mB–)dcm+ TetRgal λ(DE3) endA Hte [argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱激轉化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率可達108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。
保存與運輸條件
保存：-80℃保存，六個月有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1） 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2） 最好在冰上融化感受態(tài)細胞。
3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。
4） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。
5） 產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。
6） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】
1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA，用手輕彈管底輕輕混勻，冰浴靜置25min。
2） 42℃熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。
3） 向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
4） 低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含氯mei素（34μg/ml）以及所選質(zhì)粒篩選抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。
【注意】：
a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。
b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
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MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt羧芐青mei素二鈉鹽 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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