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產(chǎn)品中心
大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析

簡(jiǎn)要描述:

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析BL21 (DE3) pLysS菌株攜帶質(zhì)粒pLysS,具有氯mei素抗性。pLysS含有表達(dá)T7溶jun酶的基因,T7溶jun 酶能夠作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,從而能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。

產(chǎn)品時(shí)間:2024-12-16

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BL21 (DE3) pLysS Competent Cell

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

 

產(chǎn)品標(biāo)簽:

BL21 (DE3);Rosetta (DE3);Kanamycin(kan)卡那mei素;Carbenicillin 羧芐青mei素;In-fusion 一步法克隆檢測(cè)試劑盒;

 

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貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)    

MF2332-1000UL   

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞    

10×100μl     

450

MF2332-5000UL

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

50×100μl

1880


 

產(chǎn)品組分:

組分編號(hào)       

組分名稱

貨號(hào)(規(guī)格)

MF2332-1000UL     

MF2332-5000UL    

MF2332-A

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell      

10×100μl

50×100μl

MF2332-B

Control Plasmid puC19, 0.1ng/μl

10μl

10μl

 

菌株描述

BL21 (DE3) pLysS菌株攜帶質(zhì)粒pLysS,具有氯mei素抗性。pLysS含有表達(dá)T7溶jun酶的基因,T7溶jun 酶能夠作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,從而能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)。

BL21 (DE3) pLysS菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pLysS Camr


產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

 

保存與運(yùn)輸條件:

保存:-80℃保存,六個(gè)月有效。

運(yùn)輸:干冰運(yùn)輸。

 

注意事項(xiàng)

1)感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存,不可反復(fù)凍融且放置時(shí)間過長(zhǎng),否則會(huì)減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2)最好在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。

3)進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進(jìn)行。

4)為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到zui低。

5)產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(0.1ng/μl),供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。

6)BL21(DE3)pLysS菌株攜帶質(zhì)粒pLysS,除復(fù)蘇培養(yǎng)基不含抗生素外,其余所用培養(yǎng)基/培養(yǎng)液均應(yīng)含34μg/ml氯mei素,以防止質(zhì)粒丟失。

7)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


使用方法【所有操作均在無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】

1)取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管內(nèi),置于冰浴中。【注意:一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。需注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。】以下實(shí)驗(yàn)以50 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

2)向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴靜置30min。

3)42℃熱擊45s,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3min。此過程不要搖動(dòng)離心管。

4)向每個(gè)離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃ 搖床,150 rpm振蕩培養(yǎng)45min,目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。

5)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于室溫(或37℃)直至液體被吸收, 倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。

b)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。


相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)

名稱

規(guī)格            

MF2331-1000UL    

BL21 (DE3) Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2332-1000UL

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2333-1000UL

Rosetta (DE3) Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2334-1000UL

BL21 Star (DE3) Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2335-1000UL

BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞    

10×100μl

MS0021-10G

Chloramphenicol, USP Grade 氯mei素

10g

MS0018-10G

Ampicillin, Sodium Salt 氨芐青mei素鈉

10g

MS0017-5G

Carbenicillin, Disodium Salt 羧芐青mei素二鈉鹽

5g

MS0019-10G

Kanamycin Sulfate 硫酸卡那mei素

10g

MS0014-1G

Rifampicin, USP Grade 利fu平

1g

 



 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠(chéng)為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。


大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析

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